內(nèi)皮素ELISA試劑盒采用的是雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)（ELISA）。測定樣品中人內(nèi)皮素1水平。向預(yù)先包被了抗人內(nèi)皮素1抗體的酶標(biāo)孔中，加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗內(nèi)皮素1抗體。再與HRP標(biāo)記的鏈霉親和素結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入顯色底物TMB，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。最后，在450nm處測定反應(yīng)孔樣品吸光度（OD）值，樣本中的人內(nèi)皮素1濃度與OD值成正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中人內(nèi)皮素1的濃度。

　　內(nèi)皮素ELISA試劑盒操作步驟

　　1.取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。

　　2.分組：取出96孔板，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個濃度）、空白孔、待測樣品組。

　　注：為減少實驗誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。

　　3.加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入00ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入00ul的蒸餾水；其余微孔中加入00ul的待測樣本。

　　4.加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對照孔除外）。

　　5.溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育小時。

　　6.洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置5-30s，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙*拍干。

　　7.顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。

　　8.終止：25-37℃下避光反應(yīng)0-5分鐘，加入50ul終止液。

　　9.讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值。

　　內(nèi)皮素ELISA試劑盒切勿冷凍，避免陽光直曬。未使用完的酶標(biāo)板條應(yīng)密封，2-8℃保存，具有方便、快速、靈敏等特點，因其性質(zhì)、使用方便、價格低廉等特點。