基因組DNA去污劑實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻  

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量

(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

本品采用非酶法清除RNA樣品中的基因組DNA污染。每ml試劑處理～100μg RNA樣品。很多用戶在提取RNA的時(shí)候由于操作因素或者RNA抽提試劑質(zhì)量問(wèn)題，造成所得到的RNA樣品中混雜基因組污染，在普通或者變性電泳的時(shí)候直接肉眼可見程度不一的DNA污染雜帶。即使用市售的RNase-free的DNase消化DNA也不容易清除完全，而且常常導(dǎo)致RNA降解。本品不含DNA酶，在烈抑制RNA酶的條件下徹底清除RNA樣品中的污染DNA雜帶和蛋白質(zhì)污染，同時(shí)進(jìn)一步純化RNA。后通過(guò)異丙醇沉淀回收的RNA純度極高，完全不影響原有RNA質(zhì)量和下游應(yīng)用。