試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中NA 表達。用純化的NA 抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中NA 相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的NA 抗體結(jié)合,形成抗體 抗原 酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相比較,從而判定標本中NA 的存在與否。在反應(yīng)體系中,OD 值的高低與樣品中 NA(去甲腎上腺素)的含量呈正相關(guān)。當樣品中 NA 濃度較高時,更多的 NA 會與固相抗體結(jié)合,進而吸引更多的 HRP 標記抗體參與形成復(fù)合物,導(dǎo)致在加入底物 TMB 后,藍色產(chǎn)物及隨后的黃色產(chǎn)物生成量增多,酶標儀測得的 OD 值隨之升高。反之,若樣品中 NA 含量低,則形成的復(fù)合物數(shù)量有限,TMB 轉(zhuǎn)化效率低,OD 值相應(yīng)降低。
為了確保實驗結(jié)果的準確性,還需注意控制實驗條件,如溫度、時間以及試劑的純度與濃度,這些因素均可影響酶促反應(yīng)速率及顏色變化強度,進而影響 OD 值的讀數(shù)。此外,設(shè)立陽性對照、陰性對照及空白對照,能有效驗證實驗流程的合理性,排除假陽性或假陰性結(jié)果的可能性。
通過對多個樣本的 OD 值進行統(tǒng)計分析,不僅能定性判斷 NA 的存在與否,還能在一定程度上實現(xiàn)定量檢測,為科研工作者及臨床醫(yī)生提供關(guān)于 NA 水平變化的可靠數(shù)據(jù)支持,有助于深入探究 NA 在生理病理過程中的作用機制,以及為相關(guān)疾病的診斷、治療監(jiān)測提供科學(xué)依據(jù)。以及為相關(guān)疾病的診斷、治療監(jiān)測提供科學(xué)依據(jù)。
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