重組蛋白質(zhì)生產(chǎn)實驗步驟

1.  在懸浮培養(yǎng)液中培養(yǎng)Sf9細胞，并使之適應無血清培養(yǎng)液。

2.  準備旋轉培養(yǎng)瓶，用于按比例擴增Sf9細胞，將合適大小的兩孔蓋連接在轉瓶的一個 側臂，另用一平蓋接在另一側臂。將一段短管（約6英寸或15 cm）裝在通氣孔中，末端連接一濾器，借助張力器用管索將管子與通氣孔和濾器固牢。

3.  將一段長管（30~60 cm）連接至進氣孔，并在末端連接一濾器，用管索加固，另一段管子連接于濾器的另一端，用管索固牢。管子末端用鋁箔封好。

4.  將與兩孔裝置相對的側壁上的蓋子旋轉90度以松開，高壓滅菌培養(yǎng)瓶1 h。

5.  將適應了無血清培養(yǎng)液的細胞接種于經(jīng)高壓滅菌的培養(yǎng)瓶中。將培養(yǎng)瓶裝至半滿至全滿之間，加入足夠的無血清培養(yǎng)液以使細胞終密度達到5×105~6×105細胞/ml 至1.5×106細胞/ml。

6.  將培養(yǎng)瓶放在27℃培養(yǎng)箱中的磁力攪拌器上。將攪拌速度設置在80 r/min。從進 氣管的末端移去鋁箔，并將它連接到供氣泵。接通泵的電源，使其流量達到500~700 ml/min。

7.  細胞生長至密度約1.5×106細胞/ml。在層流室中將感染復數(shù)（MOI）為1~2的病毒通過側臂直接加到培養(yǎng)瓶中。 

8.  于27℃將培養(yǎng)瓶置于磁力振蕩器上并通氣，確定溫育培養(yǎng)物的時間。 

9.  處理上清得到分泌蛋白或處理細胞得到胞內(nèi)蛋白。重組蛋白質(zhì)生產(chǎn)實驗步驟