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產品名稱：大鼠表皮角化上皮細胞
貨號：GOY-01X1316
分類：原代細胞
2.組織來源：皮膚組織
3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
4.細胞簡介：大鼠表皮角化細胞分離自皮膚組織；表皮位于動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結構，由復層扁平上皮構成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質層。表皮角化細胞（KC）是構成表皮的主要細胞成分，在體內處于不斷增殖過程中，分裂的角化細胞主要位于其基底層，少數位于棘細胞層。隨著向表層的推移，細胞的分化程度逐漸增加，并喪失分裂活性。
5.方法簡介：公司實驗室分離的大鼠表皮角化上皮細胞先消化、后-膠原酶混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質量檢測：公司實驗室分離的大鼠表皮角化上皮細胞經PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息：包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） 培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細胞形態(tài) 上皮細胞樣 傳代特性 可傳1-3代左右；2代以內狀態(tài) 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
培養(yǎng)操作：
大鼠表皮角化上皮細胞1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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