簡要描述:產(chǎn)品可保大鼠脊髓神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞的生長狀態(tài)。本產(chǎn)品中已包含大鼠脊髓神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞生長所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于大鼠脊髓神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞的體外培養(yǎng)。本產(chǎn)品僅供進(jìn)一步科研使用,不得用于診斷、治療、臨床、家庭及其它用途。
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱:大鼠脊髓神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞
貨號(hào):GOY-01X1371
分類:原代細(xì)胞
2.組織來源:脊髓組織
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡介:大鼠脊髓神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞分離自脊髓組織;脊髓是細(xì)細(xì)的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu),位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護(hù);是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息。人和脊椎動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分,在椎管里面,上端連接延髓,兩旁發(fā)出成對(duì)的神經(jīng),分布到四肢、體壁和內(nèi)臟。脊髓的內(nèi)部有一個(gè)H形(蝴蝶型)灰質(zhì)區(qū),主要由神經(jīng)細(xì)胞構(gòu)成;在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū),主要由有髓神經(jīng)纖維組成;脊髓是許多簡單反射的中樞。脊髓兩旁發(fā)出許多成對(duì)的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng))分布到全身皮膚、肌肉和內(nèi)臟器官。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路,也是許多簡單反射活動(dòng)的低級(jí)中樞。按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應(yīng)的31節(jié),31對(duì)脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,簡稱膠質(zhì)細(xì)胞,是神經(jīng)組織中除神經(jīng)元以外的另一大類細(xì)胞,也有突起,但無樹突和軸突之分,廣泛分布于中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)。在哺乳類動(dòng)物中,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元的細(xì)胞數(shù)量比例約為10:1。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞主要有星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞(與前者合稱為大膠質(zhì)細(xì)胞)和小膠質(zhì)細(xì)胞等。傳統(tǒng)認(rèn)為膠質(zhì)細(xì)胞屬于結(jié)締組織,其作用僅是連接和支持各種神經(jīng)成分,其實(shí)神經(jīng)膠質(zhì)還起著分配營養(yǎng)物質(zhì)、參與修復(fù)和吞噬的作用,在形態(tài)、化學(xué)特征和胚胎起源上都不同于普通結(jié)締組織。
5.方法簡介:公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脊髓神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞采用膠原酶-聯(lián)合消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來,細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測(cè):公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脊髓神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)GC(Galactocerebroside)免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:包被條件 PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、PDGF-AA、bFGF、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形 傳代特性 不增殖;不傳代 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
培養(yǎng)操作:
大鼠脊髓神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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