簡要描述:產(chǎn)品可保小鼠羊膜間質(zhì)細胞的生長狀態(tài)。本產(chǎn)品中已包含小鼠羊膜間質(zhì)細胞生長所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于小鼠羊膜間質(zhì)細胞的體外培養(yǎng)。本產(chǎn)品僅供進一步科研使用,不得用于診斷、治療、臨床、家庭及其它用途。
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱:小鼠羊膜間質(zhì)細胞
貨號:GOY-01X1376
分類:原代細胞
2.組織來源:胎盤組織
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
4.細胞簡介:小鼠羊膜間質(zhì)細胞分離自胎盤組織;胎盤(placenta)是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官,由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育,依靠胎盤從母體取得營養(yǎng),而雙方保持相當?shù)莫毩⑿浴LケP還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素,是一個重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代,胚胎生長出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合,以達到母子間物質(zhì)的交換,這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。羊膜是胎盤的內(nèi)層,與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似,含有眼表上皮細胞,包括結(jié)膜細胞和角膜上皮細胞生長所需要的物質(zhì),其光滑,無血管、神經(jīng)及淋巴,具有一定的彈性;在電鏡下,其分為五層:上皮層、基底膜、致密層、纖維母細胞層和海綿層,羊膜基底膜和羊膜羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元,主要為Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份。羊膜細胞主要由羊膜上皮細胞和羊膜間充質(zhì)細胞組成,均具有多分化潛能,可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元,且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和神經(jīng)營養(yǎng)因子的功能。
5.方法簡介:公司實驗室分離的小鼠羊膜間質(zhì)細胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測:公司實驗室分離的小鼠羊膜間質(zhì)細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息: 培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細胞形態(tài) 成纖維細胞樣 傳代特性 可傳3代左右 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
培養(yǎng)操作:
小鼠羊膜間質(zhì)細胞1)復(fù)蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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