簡要描述:產(chǎn)品可保小鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞的生長狀態(tài)。本產(chǎn)品中已包含小鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞生長所需的各種成分,無需添加任何成分,可直接用于小鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞的體外培養(yǎng)。本產(chǎn)品僅供進(jìn)一步科研使用,不得用于診斷、治療、臨床、家庭及其它用途。
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱:小鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞
貨號(hào):GOY-01X1410
分類:原代細(xì)胞
2.組織來源:視網(wǎng)膜組織
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡介:小鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞分離自視網(wǎng)膜組織;視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層,是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成,兩層間在病理情況下可分開,稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連,由色素上皮細(xì)胞組成,它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層,由外向內(nèi)分別為:色素上皮層、視錐、視桿細(xì)胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜,有感光作用;后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個(gè)神經(jīng)元組成。神經(jīng)元是視細(xì)胞層,專司感光,它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上,而視錐細(xì)胞則在中心凹處多。第二層叫雙節(jié)細(xì)胞,約有10到數(shù)百個(gè)視細(xì)胞通過雙節(jié)細(xì)胞與一個(gè)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系,負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細(xì)胞層,專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu),它貼于眼球的后壁部,傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動(dòng)的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面,經(jīng)由視神經(jīng)到達(dá)出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,在黃斑區(qū),其分辨能力。它是組成血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞,它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對(duì)維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用,在視網(wǎng)膜血管疾病的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義。周細(xì)胞(pericyte)又稱Rouget細(xì)胞和壁細(xì)胞,是一種包圍全身毛細(xì)血管和靜脈中內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞,可以收縮。周細(xì)胞嵌入毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的基膜中,通過物理接觸和旁分泌信號(hào)與內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞通訊,監(jiān)視和穩(wěn)定內(nèi)皮細(xì)胞的成熟過程。此外,周細(xì)胞還具有調(diào)控毛細(xì)血管血流量、細(xì)胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用,其多功能性是目前研究的熱點(diǎn)之一,所以對(duì)血管周細(xì)胞的生物學(xué)特征、標(biāo)記物、細(xì)胞功能等的研究都為相關(guān)研究提供基礎(chǔ)資料。周細(xì)胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控毛細(xì)血管的血流量。周細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間共同擁有一個(gè)基膜,基膜上有多種細(xì)胞連接,包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素、纖連蛋白以及接合素。它還參與毛細(xì)血管直徑的雙向調(diào)控;毛細(xì)血管受損時(shí),周細(xì)胞還可增殖,分化為內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。
5.方法簡介:公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測(cè):公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息: 培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每3-4天換液一次; 生長特性 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣 傳代特性 可傳1-2代左右; 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
培養(yǎng)操作:
小鼠視網(wǎng)膜微血管周細(xì)胞1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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