丙糖磷酸異構(gòu)酶1(TPI1)重組蛋白(Mouse，小鼠)

簡(jiǎn)要描述：丙糖磷酸異構(gòu)酶1(TPI1)重組蛋白(Mouse，小鼠)緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

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產(chǎn)品名稱：丙糖磷酸異構(gòu)酶1(TPI1)重組蛋白(Mouse，小鼠)

物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)

英文名稱：Recombinant Triosephosphate Isomerase 1 (TPI1)

TIM; Triose-phosphate isomerase

型號(hào)：GOY-01D1642

物種	Mus musculus (Mouse，小鼠)
來(lái)源	原核表達(dá)
宿主	E.coli
亞細(xì)胞定位	n/a
預(yù)測(cè)分子量	-
實(shí)際分子量
片段與標(biāo)簽	N-terminal His Tag
緩沖液成份	磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）
性狀	凍干粉
純度	> 97%
內(nèi)毒素水平	<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)
等電點(diǎn)
應(yīng)用	Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格	10μg50μg200μg1mg5mg

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 丙糖磷酸異構(gòu)酶1(TPI1)重組蛋白(Mouse，小鼠)在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；

3．取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4．取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5．分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1．貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2．懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3．在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4．細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）

7．分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融

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