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簡要描述：N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶2(ASAH2)真核蛋白(Human，人)緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）
產(chǎn)品型號：GOY-01D3067 廠商性質(zhì)：科研更新時間：2023-10-24 00:00:00訪 問 量：211產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱：N-?；拾贝减０匪饷?span lang="EN-US">2(ASAH2)真核蛋白(Human，人)
物種：Homo sapiens
(Human，人)
英文名稱：Eukaryotic
N-Acylsphingosine Amidohydrolase 2 (ASAH2)
HNAC1; non-lysosomal ceramidase; Neutral ceramidase
型號：GOY-01D3067
物種 | Homo sapiens (Human，人) |
來源 | 真核蛋白 |
宿主 | E.coli |
亞細(xì)胞定位 | 細(xì)胞膜 |
預(yù)測分子量 | 106.0kDa |
實際分子量 | 100kDa(差異分析請參閱說明書) |
片段與標(biāo)簽 | Phe99~Ile780 with N-terminal His Tag and
C-terminal Fc Region of Human IgG1 |
緩沖液成份 | 磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM
DTT, 5% Trehalose和Proclin300.） |
性狀 | 凍干粉 |
純度 | > 80% |
內(nèi)毒素水平 | <1.0EU/μg(LAL法測定) |
等電點 | 7.2 |
應(yīng)用 | Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. |
規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1．N-?；拾贝减０匪饷?span lang="EN-US">2(ASAH2)真核蛋白(Human，人)在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2． 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；
3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；
4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；
2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；
6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）
7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融
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