酸性神經(jīng)鞘磷脂酶(ASM)活性蛋白(Human，人)

簡(jiǎn)要描述：酸性神經(jīng)鞘磷脂酶(ASM)活性蛋白(Human，人)緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

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詳細(xì)介紹

產(chǎn)品名稱(chēng)：酸性神經(jīng)鞘磷脂酶(ASM)活性蛋白(Human，人)

物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱(chēng)：Active Acid Sphingomyelinase (ASM)

SMPD1; NPD; SMase; aSMase; Sphingomyelin Phosphodiesterase 1,Acid Lysosomal; Simply Sphingomyelinase

型號(hào)：GOY-01D3172

物種	Homo sapiens (Human，人)
來(lái)源	活性蛋白
宿主	E.coli
亞細(xì)胞定位
預(yù)測(cè)分子量
實(shí)際分子量
片段與標(biāo)簽
緩沖液成份	磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）
性狀	凍干粉
純度	> 95%
內(nèi)毒素水平
等電點(diǎn)	7.2
應(yīng)用	Cellculture;ActivityAssays.
規(guī)格	10μg50μg200μg1mg5mg

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1．酸性神經(jīng)鞘磷脂酶(ASM)活性蛋白(Human，人)在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；

3．取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4．取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5．分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1．貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2．懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3．在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4．細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）

7．分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融

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