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簡(jiǎn)要描述：耶氏肺孢子蟲探針法熒光定量PCR 試劑盒操作簡(jiǎn)單為了使實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定、有效、可靠，我們建議使用商品化的試劑盒進(jìn)行提取，嚴(yán)格按照對(duì)應(yīng)試劑盒說明書進(jìn)行操作，樣本核酸提取過程中應(yīng)避免污染，提取好的模板樣品如不能立即檢測(cè)，建議-15℃以下保存。
產(chǎn)品型號(hào)：GOYL44N廠商性質(zhì)：科研更新時(shí)間：2024-03-01 13:18:57訪 問 量：329產(chǎn)品分類
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基本屬性：
| 【產(chǎn)品名稱】 | 牛傳染性鼻氣管炎病毒探針法熒光定量 PCR 試劑盒 |
| 【型號(hào)】 | GOYL44N |
| 【包裝規(guī)格】 | 50次/盒 |
特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。 2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。 3.提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。 4.特異性高，引物是根據(jù)曲霉屬通用DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他微生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。 5.既可用于定性檢測(cè)，又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí)。 6.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。 7本產(chǎn)品只能用于科研。 |
【使用方法】
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對(duì)照。 1.標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2，1。 2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同。 3.在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 4.換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 5.換槍頭，在4號(hào)管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 6.重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備 7.如果有N個(gè)樣品待提取，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的是PC（樣品制備陽性對(duì)照）和NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以取陽性對(duì)照的1000倍稀釋液10μL再加上一定量的水，使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致，以此作為PC。另外用水作為NC。 8.用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)兼容。 三Probe qPCR反應(yīng)（20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行） 9.如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽性對(duì)照（用第4號(hào)管的陽性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。 10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分 |
數(shù)據(jù)處理
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽性或陰性，則陰性對(duì)照 Ct 必須大 于或等于 40。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該 小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小于 40，則為陽性。
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