簡要描述:輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中
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輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法
分光光度法 50 管/24 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義
輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三 羧酸循環(huán)(TCA)的主要?dú)涫荏w,生成的 NADH 經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧, 在合成 ATP 的同時(shí),形成大量的 ROS,同時(shí) NADH 再生為 NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代 謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的 高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和 TCA 循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的 NAD(H)及 NADH/NAD+比值說明細(xì)胞 呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。
測定原理
分別用酸性和堿性提取液提取樣品中 NAD+和 NADH,NADH 通過 PMS 的遞氫作用,還原 氧化型噻唑藍(lán)(MTT)為甲瓚,在 570nm 下檢測吸光值;而 NAD+可被乙醇脫氫酶還原為 NADH,進(jìn)一步采用 MTT 還原法檢測。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
酸性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存; 堿性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 4 mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×1 瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入 4mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;
試劑四:粉劑×1 瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入 4mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;
試劑五:液體 1.8mL×1 支,4 ℃保存;
試劑六:液體 30mL×1 瓶,4 ℃保存;
試劑七:液體 50mL×1 瓶,4 ℃保存。
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