NADP磷酸酶(NADPase)測(cè)試盒可見分光光度法
分光光度法 50 管/48 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
NADPase 主要存在于植物組織中,是生物體內(nèi)唯一催化 NADP+降解為 NAD+的酶,與 NADK
一起調(diào)控 NAD 和 NADP 之間的平衡。
測(cè)定原理:
NADPase 能夠催化 NADP+水解為 NAD+和無機(jī)磷的反應(yīng),通過測(cè)定無機(jī)磷的量來測(cè)定
NADPase 活性。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰
和蒸餾水
試劑的組成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 30 mL×1 瓶, 4℃保存。
試劑二:粉劑×5 支,-20℃保存;用時(shí)每支加入 1 mL 試劑一充分溶解備用;用不完的試劑
分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑三:粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時(shí)加入 25mL 蒸餾水,溶解后 4℃可保存一周。
試劑四:粉劑×1 瓶, 4℃保存。用時(shí)加入 25mL 蒸餾水,溶解后 4℃可保存一周。
試劑五:液體 25mL×1 瓶,室溫保存。
試劑六:10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶,4℃保存。
0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制:將試劑六 20 倍稀釋,即取 0.5mL 試劑六加 9.5 蒸餾水,
充分混勻。
定磷試劑的配制:按 H2O: 試劑三:試劑四:試劑五=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷試劑
應(yīng)為淺黃色,若無色則試劑失效,若是藍(lán)色則為磷污染,定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意:配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
