磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)測(cè)試盒紫外分光光度法
50 管/48 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
PEPC(EC 4.1.1.31)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和細(xì)胞中,是催化磷酸烯醇式丙酮酸
與二氧化碳反應(yīng)生成草酰乙酸呈不可逆反應(yīng)的酶,對(duì)三羧酸循環(huán)的運(yùn)轉(zhuǎn)起重要調(diào)節(jié)作用。
測(cè)定原理:
PEPC 催化磷酸烯醇式丙酮酸和 CO2生成草酰乙酸和 HPO42-,蘋果酸脫氫酶進(jìn)一步催化草
酰乙酸和 NADH 生成蘋果酸和 NAD+,在 340nm 測(cè)定 NADH 減少速率,計(jì)算 PEPC 活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 30 mL×1 瓶, 4℃保存;
試劑二:液體 10 mL×1 瓶, 4℃保存;
試劑三:粉劑×2 支,-20℃保存,臨用前加入 4mL 蒸餾水充分溶解待用;現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑四:粉劑×1 支,-20℃保存,臨用前加入 5mL 蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑分裝
后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑五 :原液 20μL×1 支,4℃保存;
試劑五:稀釋液 10mL×1 瓶,4℃保存;
