糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒紫外分光光度法
50 管/24 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶,使糖
原分子從非還原端逐個(gè)斷開(kāi)α-1,4-糖苷鍵移去葡萄糖基,釋放 1-磷酸葡萄糖,直至臨近糖
原分子α-1,6-糖苷鍵分支點(diǎn)前 4 個(gè)葡萄糖基處。GP 分為有活性的糖原磷酸化酶 a(GPa)
和無(wú)活性的糖原磷酸化酶 b(GPb)兩種形式。GPb 在一定濃度的腺苷酸(
5,-AMP)存在下可被激活。
測(cè)定原理:
GP 催化糖原和無(wú)機(jī)磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和 1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖變位酶和 6-磷
酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化 NADP 還原生成 NADPH,在 340nm 下測(cè)定 NADPH 上升
速率,即可反映 GP 活性。添加一定濃度的腺苷酸(
5,-AMP)時(shí)測(cè)定 GP(GPa 和 GPb)活
性,未添加腺苷酸(
5,-AMP)時(shí)測(cè)定 GPa 活性,GP 活性-GPa 活性得到 GPb 活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 40 mL×1 瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃保存;
試劑三:粉劑×1 支,-20℃保存;
試劑四:粉劑×1 支, -20℃保存;
試劑五:粉劑×1 支, -20℃保存
