簡(jiǎn)要描述:線(xiàn)粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒CA 是線(xiàn)粒體三羧酸循環(huán)的第一個(gè)中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰 CoA 與草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。
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線(xiàn)粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒紫外分光光度法
50管/48樣 25 管/24 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
CA 是線(xiàn)粒體三羧酸循環(huán)的第一個(gè)中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰 CoA 與草酰乙酸合成,
其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。
配合測(cè)定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰 CoA 含量、檸檬酸合酶活性和 CA 含量,
其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進(jìn)行程度,(2)綜合分析丙
酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰 CoA 含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰
CoA 情況,(3)乙酰 CoA 含量、檸檬酸合酶活性和 CA 含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進(jìn)行
狀況。
測(cè)定原理:
CA 在檸檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下,α-酮酸進(jìn)一步
與苯肼反應(yīng),生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在 330nm 處有吸收峰,該波長(zhǎng)下吸光度
的變化程度可反映出 CA 的含量。
自備儀器和用品:
分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL 石英比色皿、研缽和蒸餾水。
試劑組成和配制:
酸性提取液:液體 25mL×1 瓶,4℃保存。
堿性提取液:液體 25mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 7.5mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 2.5mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 7.5mL 蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑 4℃
保存;
標(biāo)準(zhǔn)品:液體 1mL×1 支,10μmol/mL 檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。
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