簡要描述:多殺巴斯德菌PCR檢測試劑盒品牌是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品, 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng),具有廣泛的用途。
產(chǎn)品分類
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性能指標(biāo):點(diǎn)擊了解更多PCR檢測試劑盒。
.多殺巴斯德菌PCR檢測試劑盒品牌試劑盒檢測特異性為00%
2. 檢測試劑盒重現(xiàn)性為00%
3. 靈敏度可達(dá)到03/ml
4. 有效期為6個月產(chǎn)品名稱:多殺巴斯德菌PCR檢測試劑盒品牌
英文名稱:Pasteurella multocidaPCR
規(guī)格:詳見說明書
類別:PCR檢測試劑盒
運(yùn)輸:低溫、避光、快遞免費(fèi)送貨上門。
用途:生化實(shí)驗(yàn),合成實(shí)驗(yàn)等試驗(yàn)。
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個月。
自備試劑:樣品 RNA。
使用方法:
一、多殺巴斯德菌PCR檢測試劑盒品牌樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。?RNase-free 水英文名(EN):6-Methyluracil (HPLC,97%)CAS No.:626-48-2規(guī)格(SP):00G類別(Key):通用試劑
RNase-free 水英文名(EN):5-Fluorouracil,≥99%CAS No.:5-2-8規(guī)格(SP):G類別(Key):通用試劑
RNA洗脫液英文名(EN):L-(?)-Glucose,≥99%CAS No.:92-60-8規(guī)格(SP):250MG類別(Key):通用試劑
RNA洗脫液英文名(EN):L-(+)-Lyxose,99%CAS No.:949-78-6規(guī)格(SP):G類別(Key):通用試劑
RNA溶解液 英文名(EN):β-D-Ribofuranose -acetate 2,3,5-trib...CAS No.:6974-32-9規(guī)格(SP):G類別(Key):通用試劑
RNase-free CTAB溶液,20%英文名(EN):2,3,5-Tri-O-benzyl-β-D-arabinofuranos...CAS No.:60933-68-8規(guī)格(SP):5G類別(Key):通用試劑
RNase-free DTT溶液,M英文名(EN):,2,3,5-Tetra-O-acetyl-β-D-ribofurano...CAS No.:3035-6-5規(guī)格(SP):5G類別(Key):通用試劑
RNase-free EDTA溶液,0.5 M,pH 8.0英文名(EN):2-Deoxy-D-galactose,98%CAS No.:949-89-9規(guī)格(SP):G類別(Key):通用試劑
RNase-free 75%乙醇英文名(EN):Diacetone-D-Mannitol,98%CAS No.:707-77-3規(guī)格(SP):5G類別(Key):通用試劑
RNase-free 鹽酸胍溶液,8M英文名(EN):Diacetone-D-galactose,97%CAS No.:790544規(guī)格(SP):5G類別(Key):通用試劑
RNase-free 異硫氰酸胍溶液,5M英文名(EN):beta-D-Galactose Pentaacetate,98%CAS No.:463-60-4規(guī)格(SP):5G類別(Key):通用試劑
RNase-free 氯化鋰溶液,0M英文名(EN):D-Glucal,96%CAS No.:3265-84-4規(guī)格(SP):G類別(Key):通用試劑
RNase-free PVP K30溶液,20%英文名(EN):Monoacetone glucose,≥98%CAS No.:8549-40-規(guī)格(SP):5G類別(Key):通用試劑
RNase-free Sarkosyl溶液,0%英文名(EN):,2:3,5-Di-O-isopropylidene-alpha-D-xy...CAS No.:2088-04-3規(guī)格(SP):5G類別(Key):通用試劑
RNase-free SDS溶液,0%英文名(EN):D-Galactal,95%CAS No.:293-75-9規(guī)格(SP):500MG類別(Key):通用試劑
RNase-free 乙酸鈉,3M,pH 5.2英文名(EN):β-D-(+)-Glucose pentaacetate,98%CAS No.:604-69-3規(guī)格(SP):25G類別(Key):通用試劑
RNase-free Tris HCl,M,pH 6.5英文名(EN):α-D(+)-Glucose pentaacetate,99%CAS No.:604-68-2規(guī)格(SP):25G類別(Key):通用試劑
RNase-free Tris HCl,M,pH 7.0英文名(EN):D-(+)-Glucose monohydrate,≥99.5%CAS No.:443-43-7規(guī)格(SP):250G類別(Key):通用試劑
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注意事項(xiàng):
①多殺巴斯德菌PCR檢測試劑盒品牌加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
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