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簡要描述：NR8383 [AgC11x3A; NR8383.1] (大鼠肺泡巨噬細胞)生長培養(yǎng)基Ham'sF-12K＋20%FBS＋1%P/S 凍存液：55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
產(chǎn)品型號：GOY-01X0171 廠商性質(zhì)：科研更新時間：2023-10-24 00:00:00訪 問 量：521產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
NR8383 [AgC11x3A; NR8383.1] (大鼠肺泡巨噬細胞) | 1×10?/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0171 |
商品詳情：
名稱；NR8383 [AgC11x3A; NR8383.1] (大鼠肺泡巨噬細胞) (種屬鑒定正確)
別稱 NR-8383; NR 8383; NR8383.1;
AgC11x3A; Normal Rat, August 3, 1983
種屬 大鼠
生長特性 半貼半懸
細胞形態(tài) 巨噬細胞樣
生長培養(yǎng)基 Ham's F-12K＋20% FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 2×10^5-5×10^5cells/mL
推薦換液頻率 2~3次/周
背景描述 NR8383細胞來源于肺灌洗時的正常大鼠肺泡巨噬細胞，NR8383細胞在Gerbil肺細胞連續(xù)培養(yǎng)液存在下培養(yǎng)了8-9個月。隨后，NR8383細胞不再需要外源生長因子。通過有限稀釋法，從單個細胞克隆并亞克隆NR8383細胞，并3次用軟瓊脂亞克隆。NR8383細胞表現(xiàn)出巨噬細胞的特性：吞噬酵母多糖和銅綠、非特異性脂酶活性、Fc受體、氧化降解；分泌IL-1、TNF
beta和IL-6，可重復(fù)地響應(yīng)外源生長因子。NR8383細胞響應(yīng)博萊霉素，分泌TGF beta前體。NR8383細胞在博萊霉素刺激下，TGF beta mRNA表達也上升。NR8383細胞對內(nèi)毒素敏感，1-10ng/ml的LPS水平抑制增生達50%。即使達到0.001mg/ml的水平，LPS抑制還是無毒且在后續(xù)過程中可逆的。NR8383細胞提供了高響應(yīng)的肺泡巨噬細胞的均一來源，可以用于體外研究巨噬細胞相關(guān)活性，此細胞懸浮-貼壁混合生長。
組織來源 肺；巨噬細胞；肺泡
細胞類型 自發(fā)永生化細胞
生物安全等級 1
受體表達情況 Fc
基因表達情況 transforming growth factor
beta (TGF beta); interleukin 1 (IL-1); interleukin 6 (IL-6)
細胞培養(yǎng)步驟：
一、NR8383 [AgC11x3A; NR8383.1] (大鼠肺泡巨噬細胞)復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、 對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
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