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簡要描述：P19 [P-19] (小鼠畸胎瘤細(xì)胞)生長培養(yǎng)基MEMα＋7.5%CS＋2.5%FBS＋1%P/S 凍存液：55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
產(chǎn)品型號：GOY-01X0178 廠商性質(zhì)：科研更新時(shí)間：2023-10-24 00:00:00訪 問 量：525產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
P19 [P-19] (小鼠畸胎瘤細(xì)胞) | 1×10?/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0178 |
商品詳情：
名稱；P19 [P-19] (小鼠畸胎瘤細(xì)胞) (STR鑒定正確)
別稱 P-19
種屬 小鼠
生長特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
生長培養(yǎng)基 MEMα＋7.5%
CS＋2.5% FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
背景描述 P19細(xì)胞是從C3H/He小鼠中誘導(dǎo)的畸胎癌中建立的；P19細(xì)胞在含有0.1mMβ-巰基乙醇的培養(yǎng)基中克隆的效率高。細(xì)胞具有多能性：在500nM維生素A酸誘導(dǎo)下，細(xì)胞可以分化成神經(jīng)樣和神經(jīng)膠質(zhì)樣細(xì)胞；在0.5%-1.0%二甲亞砜(DMSO)存在下，細(xì)胞分化形成心臟和骨骼肌樣基質(zhì)，但不形成神經(jīng)樣或神經(jīng)膠質(zhì)樣細(xì)胞。在DMSO和維生素A酸同時(shí)存在時(shí)，細(xì)胞的分化與只有維生素A酸一樣。
年齡（性別） 雄性
組織來源 胚胎；畸胎癌
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 其它腫瘤細(xì)胞
生物安全等級 1
倍增時(shí)間 ~48-72小時(shí)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一、P19 [P-19] (小鼠畸胎瘤細(xì)胞)復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a）、 對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。
三、細(xì)胞凍存：
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
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