線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶測(cè)試盒紫外分光光度法
25 管/24 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義
復(fù)合體Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又稱 NADH-CoQ 還原酶或 NADH 脫氫酶,廣泛存在于動(dòng)物、植物、
微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,是線粒體內(nèi)膜中最大的蛋白復(fù)合物。該酶催化一對(duì)電子從
NADH 傳遞給 CoQ,同時(shí)可使 O2還原生成 O2.-,是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生 O2.-的主要部位。
測(cè)定該酶活性,不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈(ETC)狀態(tài),而且可以反映活性氧(ROS)
生成狀態(tài)。
測(cè)定原理
復(fù)合體Ⅰ能夠催化 NADH 脫氫生成 NAD+,在 340nm 下測(cè)定 NADH 的氧化速率計(jì)算出該酶
活性的大小。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸
餾水。
試劑的組成和配制
試劑一:25mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑二:5mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑三:0.5 mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑四:25mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑五:1 mL×1 支,-20℃保存;
試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存,用時(shí)加入 2mL 蒸餾水;用不完的試劑分裝后-20℃保存,
禁止反復(fù)凍融。
工作液的配制:臨用前將試劑五轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,
禁止反復(fù)凍融。
