NAD蘋(píng)果酸脫氫酶(NADMDH)測(cè)試盒紫外分光光度法
分光光度法 50 管/48 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中 MDH 是 TCA
循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋(píng)果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋(píng)果
酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH 在細(xì)胞多種生
理活動(dòng)中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋(píng)果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧
代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH 分為 NAD-依賴(lài)的 MDH 和 NADP-依賴(lài)的
MDH,細(xì)菌中通常只含有 NAD-MDH,在真核細(xì)胞中,NAD-MDH 分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體
中。
測(cè)定原理:
NAD-MDH 催化 NADH 還原草酰乙酸生成蘋(píng)果酸,導(dǎo)致 340nm 處光吸收下降。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一、提取液 60 mL×1 瓶,在 4℃保存;
試劑二、液體 50 mL×1 瓶,在 4℃保存;
試劑三、粉劑×2 支,-20℃保存;臨用前加入 300μL 蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑
分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑四、粉劑×2 支,-20℃保存;臨用前加入 300μL 蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑
分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
